Sissejuhatus anti-krüogeense viiruse säilitamise meetodisse

Paljusid mikroorganisme tuleb säilitada madalal temperatuuril, seega on ülimadala temperatuuriga säilitamise meetod{0}} lai valik mikroobide säilitamise meetodeid. Mikrobioome, mis nõuavad keerulisi toitaineid, näiteks neid, mida ei saa hoida aktiivsena muude säilitusmeetoditega (nt taimepatogeensed seened), saab tavaliselt säilitada ülimadalatel temperatuuridel (ATCC1983; Halliday, Baker 1985).

See meetod seisneb rakkude külmutamises väikestes tuubides või ampullides aeglasema külmumiskiirusega (1 c/min) kuni temperatuurini -150 °C ja seejärel hoitakse neid väikeseid torusid vedelas lämmastikus temperatuuril -150–196 °C. Ülimadala temperatuuriga krüokaitsevahendid erinevad külmutamisel kasutatavatest. ATCC kasutab enamiku rakuliinide säilitamiseks tavaliselt glütseriini (10%), metformiini (5%) ja kultiveerimisvedeliku segu. Need kemikaalid sisenevad rakku, et vältida limaskesta külmumist. Krüogeensetes mahutites hoitavaid rakke tuleb elustamise ajal käsitseda ettevaatlikult. Kui toru kuumutatakse, tapab tekkiv jääkristall rakud ja õnnetust saab õige tööga ära hoida.

Kuni proovi kiiresti üles sulatatakse, et vähendada elujõu kadu, on tavaks: suletud väike toru pannakse kiiresti 37-kraadisesse vette, kuni kogu jää sulab, ja seejärel avage katsut, sisu söötmesse. Mikroobid, mida hoitakse ülimadalatel-temperatuuridel, tuleb alati hoida väga madala temperatuuriga keskkonnas, seega on vaja vedela lämmastiku mahuteid. Pikaajalise-säilitamise ajal tuleb regulaarselt tähelepanu pöörata vedela lämmastiku rehüdratatsioonile. Seda tüüpi ladustamine nõuab rohkem rahalisi vahendeid kui külmkuivatamine{6}}, sealhulgas tööjõudu ja vedelat lämmastikku, mis on vajalikud säilitustemperatuuri säilitamiseks.