Kuidas ELISA Kits töötab
Jun 05, 2019
Topeltantikeha sandwich meetod 1. Pakend: 0,05MPH9. karbonaadipakk puhverdatakse, et lahjendada antikeha valgusisalduseni 1 kuni 10 ug/ml. Lisage iga polüstüreenplaadi reaktsiooniavadesse 0,1 ml 4 kraadi C üleöö. Järgmisel päeval visake lahus auku ja peske seda 3 korda pesupuhvriga iga kord 3 minutit.
(lühidalt, pesemine, sama allpool). 2. Lisage proov: lisage uuritava proovi teatud lahjendus 0,1 ml ülalmainitud -pakendatud reaktsiooniavasse, inkubeerige 1 tund 37 kraadi C juures. Seejärel peske.
(Samaaegselt tehke tühi auk, negatiivse kontrolli auk ja positiivse kontrolli auk). 3. Lisage ensüümiga-märgistatud antikehad: igasse reaktsiooniauku lisage värskelt lahjendatud ensüüm-märgistatud antikeha (lahjendus pärast tiitrimist) 0,1 ml.
Inkubeerida 0,5–1 tund 37 kraadi juures ja pesta.
4. Lisage substraadi vedeliku värviekraan: lisage igasse reaktsiooniavasse ajutine preparaat TMB substraadi lahust 0,1 ml, 37 kraadi C 10 kuni 30 minutit.
5. Reaktsiooni lõpp: lisage igasse reaktsiooniauku 2M 0,05 ml väävelhapet. 6. Tulemused määravad: võib olla valgel taustal, tulemuste jälgimiseks otse palja silmaga: mida tumedam on reaktsiooniaugu sees värv, seda tugevam on positiivne aste, negatiivne reaktsioon on värvitu või väga madal, vastavalt värvile peegeldub sügavuses.
Skaneeritud paaritu väärtus: ELISA testeril lainepikkusel 450 nm (kui on BTS-i värviedastus, siis 410 nm) tühja kontrollaugu nullini, mis võeti sisse, et mõõta iga augu OD väärtust, kui see on suurem kui määratud negatiivse kontrolli OD väärtus 2,1 korda, st positiivne.
Kaudne seadus
1. Kasutage puhverdatavat pakendit, et lahjendada tuntud antigeen kuni 1 kuni 10 mg/ml augu kohta pluss 0,1 ml, 4 kraadi C üleöö;
2. Pesta järgmisel päeval 3 korda;
3. Lisage teatud lahjendus proovist (tundmatu antikeha) 0,1 ml ülalmainitud pakitud reaktsiooniavasse, inkubeerige 1 tund temperatuuril 37 kraadi C, peske;
4. (nii tühja, negatiivse kui ka positiivse augu kontroll) lisage reaktsiooniauku värskelt lahjendatud ensüümi märgisega teine antikeha (anti-antikeha) 0,1 ml;
5,37 kraadi C inkubeerimine 35-60 minutit, pesemine;
6.'Viimane kord, kui pesete DDW-ga. Ülejäänud etapid on samad, mis "topeltantikehade meetodil" 4, 5, 6.